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如何處理IGF-1試劑盒的樣本

2019-08-09 瀏覽次數(shù):2562

  IGF-1試劑盒種屬有人、大鼠、小鼠、猴、兔、豬、馬、魚、雞、鴨、羊等等;樣本包括血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織標(biāo)本等。如何處理IGF-1試劑盒的樣本:
  1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
  2.血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  不同廠家生產(chǎn)的IGF-1試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照說明書嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性,反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),孔和后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正?,F(xiàn)象,任何試劑均不可避免,可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。加樣時(shí)樣品量誤差,對(duì)于陰或很陽的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響極大,建議校對(duì)加樣器。

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