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很實(shí)用的Western Blot實(shí)驗(yàn)流程

2017-02-04 瀏覽次數(shù)：3232

什么是WB?

Western Blot中文名稱(chēng)“蛋白免疫印跡”，是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。

一.實(shí)驗(yàn)流程：

樣本制備 ---SDS-PAGE電泳---轉(zhuǎn)膜---封閉---抗體孵育---顯色

二.標(biāo)本類(lèi)型：

1.細(xì)胞培養(yǎng)上清（胞外）

2.細(xì)胞和組織裂解物

三.組織樣本處理方法：

1．采集標(biāo)本后，稱(chēng)取組織凈重，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫?/span>

2．標(biāo)本融化后置冰上，加5倍體積冷PBS（可參考文獻(xiàn)加適量蛋白酶抑制劑），低溫勻漿研磨處理；

3．4℃ 6000rpm離心15min，收集上清（注意去掉上層油脂），分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用；

4. 蛋白定量。

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